第六十六章 巨大收益（求收藏，求追讀）

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國家高技術研究發展計劃（863計劃），國家重點基礎研究發展計劃（973計劃，含重大科學研究計劃）都是國家相對超級高階的研究專案。

但凡想要拿到其中一個，都需要足夠的積累。

當然，但凡能夠拿到一個，也能讓人功成名就，幾百萬的課題經費是小菜一碟，數千萬的科研基金，也是很常見的。

而這樣的一個專案啟動資金，是袁威宏目前拿下的青年基金的百倍有餘。

再要說什麼的時候，外面做完檢查複診的病人，已經推開門。

袁威宏就不再說話，方子業也是趕緊開始薅自己的學識點，一步一步地進行閱片審視，精準診斷並用藥，然後得到了0.9的學識點。

美滋滋地開心起來。

因為即便是中南醫院，也不是那種疑難雜症遍地走的，疑難雜症自然不少，可也有簡單的病種，病人掛號的時候，可不會考慮浪費資源這樣的說法。

門診完，方子業就又得到了15點左右的學識點，這一下，即便是加點打結術到了3級，給老師送禮物。

學識點的餘額，一下子又累積到了60之多，還可以增加一個3級技能的同時，今天晚上，方子業還有細胞實驗，即將收穫，到時候觀察結果，肯定又是一筆不菲的學識點。

“師父，我先放白大褂，然後去實驗室了啊！”

“好，WB好好跑。”袁威宏交待，彷彿是在給方子業暗示，方子業在做什麼，他都瞭然於心。

方子業點了點頭，加快了腳步。

做實驗、搞錢、發文章、學識點，充實且快樂。

WB是縮寫，蛋白質免疫印跡(WesternBlot)是將蛋白質轉移到膜上，然後利用抗體進行檢測的方法。

一個基因表達終極結果是產生相應的蛋白質(或酶)。方子業研究的HK2，其實就是生物化學糖酵解過程中的第一個限速酶己糖激酶，而HK2則是己糖激酶的縮寫，己糖激酶是催化己糖使之磷酸化的酶，它是糖酵解途徑的第一個酶，也是糖酵解途徑的絕對限速酶。

眾所周知，糖酵解是糖轉化為能量的第一步，沒有糖酵解的第一步，葡萄糖和果糖想要被正常利用，是幾乎不可能的事情，而如果依靠酮體等旁路作為有氧氧化的底材，肯定無濟於事。

因此定量檢測HK2的含量，在骨鉅細胞瘤經過過表達、沉默後的絕對數量，是檢測HK2在骨鉅細胞瘤發展過程中作用的一個定量證據。

WesternBlot採用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。

經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽型別及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分……

原理聽起來頗為複雜，但其實真正要操作的時候，主要的步驟主要是以下幾步。

試劑準備，也就是讓蛋白質跑的跑道，需要聚丙烯醯胺凝膠電泳來提供。

然後是參賽的運動員，是把腫瘤細胞裂解之後，使得內部的蛋白質充分釋放，然後製作了標準曲線。

製作標準曲線之後，就可以讓自己處理的細胞產生的‘運動員’開始上賽道了。

緊接著是電泳、轉模、免疫反應、顯影等等一系列後，透過特殊的抗體和試劑，就能夠顯示目標蛋白的膠片。

將膠片進行掃描或拍照，用凝膠圖象處理系統分析目標帶的分子量和淨光密度值……

這個過程很複雜，也相對漫長，更需要耐心。

不過，方子業反正已經下了門診，來到實驗室裡，就一步一步地按部就班來做。且旁邊還有洛聽竹幫點小忙。

最後呈現出結果後，洛聽竹欣喜異常：“方師兄，你今天這個條帶顯示很清楚欸，上一次範師兄跑出來的是啞鈴狀的。”

說完，她偏頭看向方子業的成片，條帶清晰、沒有雜帶、背景乾淨！

“呈啞鈴狀一般配置膠有問題，另外還有一種可能是樣品中含有太多雜質，沒有離心下來，然後雜質沉積在孔的中間，蛋白自然被推擠到兩邊。”

“配好膠，不合格的堅決不用，不要鋌而走險。”方子業仔細想了一下原理，如此給洛聽竹解釋。

“那如果有條帶拖尾呢？”洛聽竹想了一下，又問了一個問題，應該是她跟著別人做的時候，看到過這樣的情況。

“條帶拖尾的話，一般是蛋白量濃度高或者，孵一抗濃度和時間太長。”

“蛋白含量高的話，可能是前期的文獻準備沒有確定好，我認為最有可能的是因為一抗濃度太高，作用時間太長引起。”

“當然也有其他原因。”方子業再次看了看自己的成片。

HK2與β-actin（肌動蛋白）內參兩個條帶，共有過表達、正常以及沉默三個組。

腫瘤細胞實驗的內參，特別是涉及糖酵解通路的細胞實驗內參，是不能選用常見的GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）的。

“你這張圖，直接用prism進行作圖就可以用了吧？”洛聽竹繼續問。

“應該差不多吧，條帶的厚度灰度差距還是蠻明顯的。拍個照，拍個照……”方子業趕緊讓洛聽竹也幫忙拍一張。

洛聽竹欣然答應，靈動得如同一隻勤勞的小松鼠。

而方子業此時，看著學識點飛速跳動到了134，一下子增加了足足七十點的學識點，也是知道啊，這一次的WB實驗，在這一個課題之中的作用佔比不小，可能是支撐整個課題規模的小骨架了。

“這張照片拍得怎麼樣？”洛聽竹拍完後，問方子業。

方子業泛出姨母笑，而洛聽竹則以為自己拍照的水平還不錯，於是又咔咔地來了幾張。

然後就是清理實驗臺並清洗相應的實驗器材了。

一切結束，方子業建議：“洛師妹，辛苦了，一起去吃個宵夜吧？”

洛聽竹這會兒正在左右翻看著WB成圖的照片，歪著頭點了一下：“好呀。”

……